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明胶Zymography

内容:明胶酶谱学是一个研究课题。betway亚洲在整个生命周期中,该主题共发表了186篇论文,获得了6155次引用。
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TL;博士:GTP和EGCG对豆状豆凝集素A对胶质母细胞瘤U-87细胞分泌的proMMP-2的体外激活完全抑制,表明绿茶儿茶素抑制MMP活性和proMMP-2的激活。
文摘:研究了大蒜中绿茶多酚(GTP)、白藜芦醇、染料木素和有机硫化合物等天然产物中不同生物活性成分对基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和MMP-12活性的影响。GTP对这三种酶的抑制作用最强,用明胶或弹性蛋白作为底物进行荧光测定。用明胶酶谱法证实GTP对MMP-2和MMP-9的抑制作用,并观察到与各种大鼠组织和人脑肿瘤(胶质母细胞瘤和垂体肿瘤)相关的mmp。在从绿茶中分离出的多种儿茶素(包括(-)-没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、(-)-表儿茶素没食子酸酯(ECG)、(-)-没食子儿茶素(EGC)、(-)-表儿茶素(EC)和(+)-儿茶素(C)存在的情况下,测量了MMPs的活性。通过荧光法、明胶或酪蛋白酶谱法测定,这些活性最有效的抑制剂是EGCG和ECG。GTP和不同的儿茶素对胰腺弹性蛋白酶没有影响,提示这些分子对MMP活性的影响是特异性的。此外,豆状核凝集素A对胶质母细胞瘤U-87细胞株分泌的proMMP-2的体外激活作用被GTP完全抑制,尤其是EGCG。这些结果表明,绿茶中的儿茶素抑制MMP活性和proMMP-2的激活。

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TL;博士:这种基于聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法可以对培养细胞、组织和生物液体中明胶酶的类型、相对量和激活状态(潜伏,与活性酶形式相比)提供可靠的评估。
文摘:明胶酶谱法是一种简单而有效的方法,用于检测能够降解各种生物来源明胶的蛋白水解酶。它对基质金属蛋白酶家族的两个关键成员,MMP-2(明胶酶A)和MMP-9(明胶酶B)的评估尤其有用,因为它们具有强大的明胶降解活性。这种基于聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法可以对培养细胞、组织和生物液体中明胶酶的类型、相对量和激活状态(潜伏,与活性酶形式相比)提供可靠的评估。该方法可用于研究在实验系统中调节明胶酶表达和调节酶原激活的因素。该系统提供了关于明胶酶在人类癌症组织中的表达和激活模式的信息,以及这与癌症进展的关系。解释明胶酶谱法中获得的数据需要对该技术的原理和缺陷有全面的了解;这在评估酶水平和活性明胶酶种类的存在时尤为重要。如果使用得当,明胶酶谱学是研究生物系统中明胶酶的极好工具。

325引用


期刊文章 DOI
9月01日2001 - 糖尿病
TL;博士:本研究首次提供了人类脂肪组织产生和分泌MMP-2和-9的证据,通过明胶酶谱分析,在原代培养中对以人皮下脂肪组织和人前脂肪细胞为条件的培养基进行酶谱分析,并对成熟的人脂肪细胞转录本进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分析。
文摘:脂肪细胞的肥大和增生以及血管生成有助于脂肪块的生长。由于细胞外基质(ECM)成分的变化通常与这种细胞重构相关,我们研究了基质金属蛋白酶(MMPs) 2和9的脂肪细胞表达,这是参与ECM调节的两种关键酶。本研究首次提供了人类脂肪组织产生和分泌MMP-2和-9的证据,通过明胶酶谱分析,以人皮下脂肪组织和原代培养的人前脂肪细胞为条件的培养基,并对成熟的人脂肪细胞转录本进行逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分析。对小鼠3T3F442A前脂肪细胞的进一步表征表明,在脂肪细胞分化过程中,MMP的表达(RT-PCR和Western blot分析)和活性(明胶酶谱分析)均增加,而组织抑制剂金属蛋白酶1和金属蛋白酶2的表达则分别消失或不受影响。最后,用MMP抑制剂(如巴替马斯特和卡托普利)以及中和抗体处理前脂肪细胞,显著降低了脂肪细胞的分化,这可以通过抑制脂肪生成(甘油三酯)和脂聚(甘油释放和激素敏感脂肪酶表达)标记物的出现来证明。这些数据表明,MMP-2和-9可能是脂肪细胞分化的重要关键调控因子。因此,脂肪细胞来源的mmp可能是抑制脂肪组织生长的新靶点。

307引用


期刊文章
Kazushi Imai 1英子Ohuchi 1Takanori青木Hidehiro野村 1 + 4更 机构(2
TL;博士:首次证实了MT-MMP-1是一种糊化酶,与TIMP-2在一个配合物中分泌,可形成MT-MMP-1 /TIMP2/proMMP -2的三元配合物。
文摘:通过在COS-1细胞中表达缺乏跨膜结构域(delta MT1)的MT-MMP-1缺失突变体(delta MT1)和在前肽结构域具有抗furin序列的定点突变体(突变delta MT1),研究了膜型基质金属蛋白酶1 (MT-MMP-1)的加工机制和凝胶溶解活性。delta MT1,但不是突变的delta MT1,被加工成活性形式,并显示出明胶酶谱图所示的溶解活性。从稳定转染物中与金属蛋白酶组织抑制剂2 (TIMP-2)以复合物形式分离的δ MT1显示了Ala113-IIe-Gln-Leu的nh2端序列,表明在furin识别序列下游的一个氨基酸上发生了裂解。δ MT1/TIMP-2配合物通过TIMP-2和promp -2的COOH端与promp -2形成三元配合物。人乳腺癌细胞系(MDA-MB-231细胞)也将MT-MMP-1分泌到培养基中,用TIMP-2纯化成复合物形式,通过酶谱图显示出胶溶活性。这些结果首次证明了MT-MMP-1是一种糊化酶,与TIMP-2在一个配合物中分泌,可以形成MT-MMP-1/TIMP2/proMMP-2的三元配合物。

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期刊文章
TL;博士:数据表明,在队列迁移过程中,通过MT1-MMP和MMP-2的前缘细胞特异性定位,明胶基质进行重组以适应细胞迁移,这表明重组对这种类型的迁移至关重要。
文摘:肿瘤细胞的迁移通常被评估为单细胞运动在体外使用博伊登室型试验。然而,在体内,癌细胞经常侵入周围组织,形成连贯的细胞簇或细胞巢。我们将这种类型的运动称为“队列迁移”,并开发了一个二维体外队列迁移模型,在该模型中,人直肠高分化腺癌细胞(L-10)在肝细胞生长因子/散射因子的刺激下,从堆积的细胞岛中作为连贯的细胞片迁移。在本研究中,我们研究了基质金属蛋白酶(MMP)是否存在队列迁移特异性表达方式,以及这种迁移是否需要细胞外基质降解。通过明胶酶谱、免疫印迹和逆转录pcr证实了L-10细胞能产生膜型1-MMP (MT1-MMP)和明胶酶A (MMP-2)。当肝细胞生长因子/分散因子诱导队列迁移时,MT1-MMP和MMP-2主要免疫定位于迁移细胞片前细胞前缘,后面的细胞为阴性。此外,在明胶涂层基质上的队列迁移过程中,明胶基质被细胞以非常有组织的方式降解,导致前缘位置的明胶基质呈放射状排列的裂解。MMP-2金属蛋白酶-1和-2的组织抑制剂BB94和MMP-2的cooh末端血凝蛋白样结构域抑制了明胶基质上的迁移。因此,这些数据表明,在队列迁移过程中,通过MT1-MMP和MMP-2的前沿细胞特异性定位,明胶基质被重组以适应细胞迁移,并提示重组对这种类型的迁移至关重要。

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